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鱼骨图是一种分析问题产生的质量管理手法，此鱼骨图分析造成细胞形态发生异常时的几个主要原因，依次为微生物污染、细胞层面、人为操作/环境、培养基、辅助试剂、耗材等。逍鹏生物 (XP Biomed) 技术支持部门并提供了一系列解决方案，帮助研究人员解决实验上的问题。按鱼骨的近到远及鱼刺的大到小，相应表示问题发生的概率由大到小，使用者可按图索骥，排查造成细胞培养异常的原因及对策。
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耗材 -
培养瓶1. 培养瓶属于一次性耗材，重复使用将可能造成细胞污染或是细胞无法贴壁，老化、过度活化等不稳定结果； 2. 塑料耗材从模具取下时可能会带下硅油，影响到细胞生长； 3. 大部分生产耗材车间不是洁净厂房，耗材有可能会带有异物。1. 培养瓶属于一次性耗材，重复使用将可能造成细胞污染或是细胞无法贴壁，老化、过度活化等不稳定结果；
2. 塑料耗材从模具取下时可能会带下硅油，影响到细胞生长；
3. 大部分生产耗材车间不是洁净厂房，耗材有可能会带有异物。请考察并选用品质稳定、质量达标的耗材，并要求生产商提供测试数据报告。 -
培养皿/培养孔盘质量较差的培养耗材底面在显微放大观察下可能凹凸不平，造成细胞贴壁的分散不均，在凹处形成聚集现象。质量较差的培养耗材底面在显微放大观察下可能凹凸不平，造成细胞贴壁的分散不均，在凹处形成聚集现象。请考察并选用品质稳定、质量达标的耗材，并要求生产商提供测试数据报告。
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移液管分孔移液时，枪头、移液管仅一次性使用，应及时更换，以免造成交叉污染。分孔移液时，枪头、移液管仅一次性使用，应及时更换，以免造成交叉污染。不同类型的耗材其未达到灭菌（即可能含菌）的概率在1/1000-1/1,000,000之间，是一种低概率事件。
这种随机发生的低概率事件是最难追踪调查与预防的。
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辅助试剂 -
抗生素细胞在体内是无菌状态生长，一般细胞株的常规培养，非必要时应避免添加抗生素。已知抗生素对细胞有不同影响，如: 1. β-内酰胺类抗生素(青霉素)–会影响蛋白质合成及抑制细胞增殖； 2. 氨基糖苷类氨基糖类（链霉素，卡那霉素，庆大霉素)–会减少蛋白质合成，ATP水平降低，产生细胞毒素； 3. 脂类(两性霉素B/ fungizone，制霉菌素)–干扰细胞膜，产生细胞毒性。细胞在体内是无菌状态生长，一般细胞株的常规培养，非必要时应避免添加抗生素。已知抗生素对细胞有不同影响，如:
1. β-内酰胺类抗生素(青霉素)–会影响蛋白质合成及抑制细胞增殖；
2. 氨基糖苷类氨基糖类（链霉素，卡那霉素，庆大霉素)–会减少蛋白质合成，ATP水平降低，产生细胞毒素；
3. 脂类(两性霉素B/ fungizone，制霉菌素)–干扰细胞膜，产生细胞毒性。使用抗生素的时机：
1. 原代细胞培养（因为在从组织分离时易发生污染）;
2. 观察并且确认发生微生物污染时（去除微生物后,即应停用抗生素）;
3. 尽量避免预防性使用抗生素，容易产生耐药性。 -
缓冲液PBS及DPBS是常见的洗涤缓冲液。在胰酶消化之前使用PBS洗涤残留的完全培养基，是常见的操作，(因为完全培养基内的血清含有抑制胰酶的蛋白)。如果是对于一些更难消化细胞，则必须使用不含钙镁离子的PBS，因为这些离子也会抑制胰酶的活性。 需要从正规供应商处购买以确保品质：如渗透压、无菌等。PBS及DPBS是常见的洗涤缓冲液。在胰酶消化之前使用PBS洗涤残留的完全培养基，是常见的操作，(因为完全培养基内的血清含有抑制胰酶的蛋白)。如果是对于一些更难消化细胞，则必须使用不含钙镁离子的PBS，因为这些离子也会抑制胰酶的活性。
需要从正规供应商处购买以确保品质：如渗透压、无菌等。 -
冻存液细胞解冻复苏时，不宜在冷冻管内存放太久，需尽快转移至培养基中。 细胞的状态如不佳，可提高培养基内血清的比例，隔天更换新的培养基置换掉含有DMSO的培养基。细胞复苏后状态不佳也有可能因为细胞本身冷冻后存活率低或冷冻时的细胞数较少导致。如以上都有注意到，需了解冷冻细胞时的手法是否有问题，需注意是否程序性降温。细胞解冻复苏时，不宜在冷冻管内存放太久，需尽快转移至培养基中。
细胞的状态如不佳，可提高培养基内血清的比例，隔天更换新的培养基置换掉含有DMSO的培养基。细胞复苏后状态不佳也有可能因为细胞本身冷冻后存活率低或冷冻时的细胞数较少导致。如以上都有注意到，需了解冷冻细胞时的手法是否有问题，需注意是否程序性降温。上海逍鹏可提供细胞冻存液产品：
1. 细胞冻存液 I号（货号：3510/3511，无酚红）
2. 无血清细胞冻存液 2号（货号：3522/3523，无酚红） -
胰酶1. 一旦发生消化时间变长，或是细胞消化不下来，需注意是否胰酶已经失活。胰酶是蛋白质类产品，反复冻融容易影响其活性。一般胰酶保存方式，建议用离心管分装成15或50毫升后-20℃冻存，使用前必须37℃水浴或培养箱回温。胰酶消化后使用不含钙镁的缓冲液清洗细胞。 2. 品质不佳的胰酶也容易带入支原体或动物性污染源。 3. 临床培养可选用重组胰酶，以避免引入未知动物源病原体。1. 一旦发生消化时间变长，或是细胞消化不下来，需注意是否胰酶已经失活。胰酶是蛋白质类产品，反复冻融容易影响其活性。一般胰酶保存方式，建议用离心管分装成15或50毫升后-20℃冻存，使用前必须37℃水浴或培养箱回温。胰酶消化后使用不含钙镁的缓冲液清洗细胞。
2. 品质不佳的胰酶也容易带入支原体或动物性污染源。
3. 临床培养可选用重组胰酶，以避免引入未知动物源病原体。一般胰酶保存方式，建议15或50毫升分装后-20℃冻存、使用前必须37℃水浴或培养箱回温， 胰酶消化后使用不含钙镁的缓冲液清洗细胞。
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培养基 -
血清由于血清是动物来源，批次不同时血清内成分和营养含量百分比会变化，因此更换血清批次时细胞会需要适应(例如有些批次适合养神经细胞或间充质干细胞等）。 因此更换血清批次时建议： 1. 少量置换，1/3，1/2，2/3渐进式更换； 2. 提高血清比例增加营养让细胞更快速适应； 3. 一次采购足量血清避免经常更换批号； 4. 请务必从正规经销商购买，谨防假冒伪劣。 如遇过于低廉的价格与来路不明的血清都需提高警觉（未经过冷程全程运送）。由于血清是动物来源，批次不同时血清内成分和营养含量百分比会变化，因此更换血清批次时细胞会需要适应(例如有些批次适合养神经细胞或间充质干细胞等）。
因此更换血清批次时建议：
1. 少量置换，1/3，1/2，2/3渐进式更换；
2. 提高血清比例增加营养让细胞更快速适应；
3. 一次采购足量血清避免经常更换批号；
4. 请务必从正规经销商购买，谨防假冒伪劣。
如遇过于低廉的价格与来路不明的血清都需提高警觉（未经过冷程全程运送）。上海逍鹏可提供：
各式胎牛血清、特殊加工工艺胎牛血清、新生牛血清、成牛血清和其它物种血清（猪、马、羊、免）等。 -
添加因子在临床及临床前研究所需高质量的细胞培养及分化试验，时常需要外加细胞因子，建议最好选购不含动物来源的高活性及高纯度的重组蛋白，以确保产品符合严格规范及标准化。 常见使用的添加因子如：细胞因子(Cytokine)是一类小分子蛋白质或多肽类，这些因子可以帮助细胞的生长，促进细胞活化，直接参与免疫调节和其他细胞因子的形成，也是细胞与细胞之间讯息传递的重要桥梁。在正常生理情况下细胞受到刺激后也会自然分泌，不同种类的细胞因子也会具有不同的免疫功能。然而过度的细胞因子分泌也可能会引发炎症反应，可直接/间接诱导或抑制细胞凋亡。 一些动物来源、组分复杂的添加剂，如Matrigel，批间差比全合成或单一组分试剂大，使用时必须小心注意。在临床及临床前研究所需高质量的细胞培养及分化试验，时常需要外加细胞因子，建议最好选购不含动物来源的高活性及高纯度的重组蛋白，以确保产品符合严格规范及标准化。
常见使用的添加因子如：细胞因子(Cytokine)是一类小分子蛋白质或多肽类，这些因子可以帮助细胞的生长，促进细胞活化，直接参与免疫调节和其他细胞因子的形成，也是细胞与细胞之间讯息传递的重要桥梁。在正常生理情况下细胞受到刺激后也会自然分泌，不同种类的细胞因子也会具有不同的免疫功能。然而过度的细胞因子分泌也可能会引发炎症反应，可直接/间接诱导或抑制细胞凋亡。
一些动物来源、组分复杂的添加剂，如Matrigel，批间差比全合成或单一组分试剂大，使用时必须小心注意。上海逍鹏可提供：
各类科研与临床级别细胞因子、荷尔蒙、小分子化合物等。请各地负责经销商或与技术支持部咨询。
Vitrogel 与BioLamina均为合成与组分固定的试剂，实验结果更一致，重复性高。。 -
光照紫外线会破坏培养基中的Hepes，核黄素与色氨酸，形成过氧化氢自由基，对细胞造成毒害作用。紫外线会破坏培养基中的Hepes，核黄素与色氨酸，形成过氧化氢自由基，对细胞造成毒害作用。
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L-谷氨酰胺不同的细胞培养，培养基中都需加入一定量的L-谷氨酰胺，作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺缺乏会导致细胞生长不良甚至死亡。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。因此加有L-谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时，应重新加入L-谷氨酰胺或可用添加了长效型谷氨酰胺的培养基替代。不同的细胞培养，培养基中都需加入一定量的L-谷氨酰胺，作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺缺乏会导致细胞生长不良甚至死亡。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。因此加有L-谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时，应重新加入L-谷氨酰胺或可用添加了长效型谷氨酰胺的培养基替代。
上海逍鹏可提供：
1. 长效型谷氨酰胺 L-Alanly-L-Glutamine,Cat No.:C3547；
2. 各式细胞培养辅助试剂，请治各地负责经销商或与技术支持部咨询。
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基础培养基干粉培养基：自行配置时，注意是否需要另外添加物质至培养基中(eg.碳酸氢钠需特别注意)）并调整pH。 液态培养基：使用不正确/不匹配培养基细胞仍可生长，只是特性会改变。 培养基中常用的pH指示剂：酚红(phenol red)，其实本身有微弱的雌激素(estrogen)作用，可能会刺激有雌激素受体的细胞增殖。干粉培养基：自行配置时，注意是否需要另外添加物质至培养基中(eg.碳酸氢钠需特别注意)）并调整pH。
液态培养基：使用不正确/不匹配培养基细胞仍可生长，只是特性会改变。
培养基中常用的pH指示剂：酚红(phenol red)，其实本身有微弱的雌激素(estrogen)作用，可能会刺激有雌激素受体的细胞增殖。上海逍鹏可提供：
多种不同细胞专用无血清培养基系统，及各式基础培养基。请治各地负责经销商或与技术支持部谘询。
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人为环境与操作 -
灭菌锅所有仪器与设备均需定期保养与校准，以维持正常的性能。所有仪器与设备均需定期保养与校准，以维持正常的性能。定期做BD（Bowie Dick）测试，确保压力、温度与时间均符合灭菌要求。
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显微镜置物台使用显微镜观察细胞时，放置细胞培养皿或是培养瓶的载物平台与桌面, 也须保持干净，以免造成交叉污染。使用显微镜观察细胞时，放置细胞培养皿或是培养瓶的载物平台与桌面, 也须保持干净，以免造成交叉污染。上海逍鹏可提供：
支原体/细菌/真菌污染预防喷雾剂Pharmacidal,Cat No.: C3490。 -
水浴锅水浴锅是细胞房中很容易滋生细菌与真菌的设备，在回温的过程中试剂外包装容易沾附污染源而随处传播，并且带入生物安全操作柜等环境中。水浴锅是细胞房中很容易滋生细菌与真菌的设备，在回温的过程中试剂外包装容易沾附污染源而随处传播，并且带入生物安全操作柜等环境中。水浴锅中应加入无菌超纯水，并加入抑菌剂。可选用：AkouGuard-2,Cat No.:C3481，有效消毒任何形式的水浴环境。
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生物安全柜生物安全柜需尽量保持清洁及净空，非必要性的物品不要放在里面，容易扰乱操作柜内气流。使用前一定要使用消毒杀菌溶液进行擦拭（如75%酒精或Pharmacidal），使用结束也需要进行消毒并且UV处理20分钟以上。 生物安全柜与超净工作台的高效滤网（HEPA filter）滋生细菌后反而容易成为污染源，有必要定期更换。良好的操作环境才能确保细胞的健康。生物安全柜需尽量保持清洁及净空，非必要性的物品不要放在里面，容易扰乱操作柜内气流。使用前一定要使用消毒杀菌溶液进行擦拭（如75%酒精或Pharmacidal），使用结束也需要进行消毒并且UV处理20分钟以上。
生物安全柜与超净工作台的高效滤网（HEPA filter）滋生细菌后反而容易成为污染源，有必要定期更换。良好的操作环境才能确保细胞的健康。上海逍鹏可提供：
1. 支原体/细菌/真菌污染预防喷雾剂Pharmacidal,Cat No.: C3490；
2. 定期更换生物安全柜与超净工作台HEPA滤网， 检测风速与测漏。
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CO2培养箱1. 培养箱内的CO2与温湿度需定期校正，这些都是与细胞的生长息息相关的因素； 2. 培养箱的温湿度非常适合微生物生长，需定期消毒培养箱内壁与不锈钢隔架，水盘用水需灭菌并加入抑菌剂。1. 培养箱内的CO2与温湿度需定期校正，这些都是与细胞的生长息息相关的因素；
2. 培养箱的温湿度非常适合微生物生长，需定期消毒培养箱内壁与不锈钢隔架，水盘用水需灭菌并加入抑菌剂。上海逍鹏可提供：
1. 支原体/细菌/真菌污染预防喷雾剂Pharmacidal，Cat No.: C3490；
2. AkouGuard-1,Cat No.:C3480，有效消毒培养箱中的水盘；
3. 选购可灭菌的二氧化碳培养箱，定期灭菌。
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细胞房未净化的室内空气每立方米可检测到500-2000个浮游菌。 2020药典指导原则9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则，明确规定不同洁净等级的浮游菌和沉降菌的数量要求。 细胞房内不允许穿拖鞋或凉鞋，应该穿全包裹式鞋套，或细胞房专用鞋。未净化的室内空气每立方米可检测到500-2000个浮游菌。
2020药典指导原则9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则，明确规定不同洁净等级的浮游菌和沉降菌的数量要求。
细胞房内不允许穿拖鞋或凉鞋，应该穿全包裹式鞋套，或细胞房专用鞋。1. 按要求细胞房应为封闭、正压的洁净房间（1-10级万洁净度）。若条件有限，可考虑医疗用移动式空气净化机用来净化空气。
2. 如担心污染物外泄，细胞房还应设计为负压。
3. 人员进出细胞房应有管制，经过培训才能进入操作，避免污染别人。 -
操作人员人体表面平均带有103-106/cm2的微生物，污染物可能由于操作人员及穿着的衣物带入。进出细胞房需穿着标准的实验衣，尽量降低粉尘、皮屑及附带的微生物的扬起及掉落，以免造成污染。人体表面平均带有103-106/cm2的微生物，污染物可能由于操作人员及穿着的衣物带入。进出细胞房需穿着标准的实验衣，尽量降低粉尘、皮屑及附带的微生物的扬起及掉落，以免造成污染。
人是带菌者，进细胞房应该：
1. 勤更衣：无菌无尘衣穿过六小时后可在每平方厘米中采集到个1-6个微生物。
2. 少讲话：口水中每毫升含107个微生物。应戴口罩操作。
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震动细胞刚传代或复苏时，如受到震荡摇晃会造成贴壁迟缓，甚至会有聚集成团的状况。细胞刚传代或复苏时，如受到震荡摇晃会造成贴壁迟缓，甚至会有聚集成团的状况。应避免在培养箱或是其周围摆放有震动或离心设备。
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细胞层面 -
人为选择/突变细胞在体外培养时，持续经历了人为的选择，如: 1. 胰酶消化是一种反复的人为选择过程，易被消化的细胞才会被传代； 2. 细胞过度的分化及刺激可能造成异常的突变。如HeLa 细胞虽然还保有人的基因序列，但染色体数曾被观察到有异常突变增加（原HeLa细胞染色体为46条，目前有观察到细胞存在70-90条染色体的情况）； 3. hES 细胞株已被证实其原位癌基因（TP53）随着代数增加更易有突变产生的可能性。 参考文献:“Human pluripotent stem cells recurrently acquire and expand dominant negative P53mutations”- Florian T. Merkle et al., Nature volume 545, pages 229-233 (11 May 2017)细胞在体外培养时，持续经历了人为的选择，如:
1. 胰酶消化是一种反复的人为选择过程，易被消化的细胞才会被传代；
2. 细胞过度的分化及刺激可能造成异常的突变。如HeLa 细胞虽然还保有人的基因序列，但染色体数曾被观察到有异常突变增加（原HeLa细胞染色体为46条，目前有观察到细胞存在70-90条染色体的情况）；
3. hES 细胞株已被证实其原位癌基因（TP53）随着代数增加更易有突变产生的可能性。
参考文献:“Human pluripotent stem cells recurrently acquire and expand dominant negative P53mutations”- Florian T. Merkle et al., Nature volume 545, pages 229-233 (11 May 2017)为保障实验材料的一致性，应将长期使用的细胞株建立细胞种子库(Seed Stock)与工作库(Working Stock)并定期安排身分鉴定。 -
细胞接种密度过低细胞与细胞之间会有黏附及通信的作用发生（Cell-Cell Adhesion and Communication）。这些作用参与细胞的识别、活化和信号转导，并且增殖分泌能够促进细胞生长的因子，从而形成有利于细胞生长的环境。一旦传代的密度过低皆会造成增殖速度迟缓或死亡。细胞与细胞之间会有黏附及通信的作用发生（Cell-Cell Adhesion and Communication）。这些作用参与细胞的识别、活化和信号转导，并且增殖分泌能够促进细胞生长的因子，从而形成有利于细胞生长的环境。一旦传代的密度过低皆会造成增殖速度迟缓或死亡。细胞传代时，要确实的执行细胞计数，确保铺盘的密度。
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老化细胞只要持续生长分裂就会发生老化的现象；无论是原代细胞或是细胞株（immortalized cell line）。细胞老化的特征：细胞分裂会减少(增殖变慢)、细胞大小异常增大，甚至显微镜下可以观察到四核到八核的多核现象。 如果在继代的过程发现这样的细胞变多了，表示细胞已老化。老化的细胞还不会立刻死亡，而会随着继代一直留在细胞群之中，经过一些时间之后才会发生细胞凋亡（时间长的可以到一两年）。老化的细胞基因表达谱会产生变化，因此，建议从种子库或工作库重新复苏细胞并培养。细胞只要持续生长分裂就会发生老化的现象；无论是原代细胞或是细胞株（immortalized cell line）。细胞老化的特征：细胞分裂会减少(增殖变慢)、细胞大小异常增大，甚至显微镜下可以观察到四核到八核的多核现象。
如果在继代的过程发现这样的细胞变多了，表示细胞已老化。老化的细胞还不会立刻死亡，而会随着继代一直留在细胞群之中，经过一些时间之后才会发生细胞凋亡（时间长的可以到一两年）。老化的细胞基因表达谱会产生变化，因此，建议从种子库或工作库重新复苏细胞并培养。上海逍鹏可提供细胞老化检测(Cell Senescence Detection)， Cat no.: T80500001
细胞老化检测可准确地判断出老化细胞的百分比，以决定是否要使用代数更低的细胞，以维持实验材料的一致性。 -
传代密度太高（>90％）可能会造成细胞黏附性的改变（adhesion）：细胞除了会跟基质产生黏附，细胞与细胞之间也有黏附作用。如果细胞融合度过高（>90%）才进行传代，细胞可能会发生提前老化的现象。甚至某些细胞融合度太高的话，会造成堆积或聚集（aggregates）而不再是单层细胞。这种改变常常是不可逆的，即便再重新铺板进行传代，细胞也无法恢复原状（eg.培养时总是有空隙，还没养满就堆积）。可能会造成细胞黏附性的改变（adhesion）：细胞除了会跟基质产生黏附，细胞与细胞之间也有黏附作用。如果细胞融合度过高（>90%）才进行传代，细胞可能会发生提前老化的现象。甚至某些细胞融合度太高的话，会造成堆积或聚集（aggregates）而不再是单层细胞。这种改变常常是不可逆的，即便再重新铺板进行传代，细胞也无法恢复原状（eg.培养时总是有空隙，还没养满就堆积）。
尽量避免融合度过高,融合度约达到80%即可分盘。
Confluence融合度：在细胞培养中指的是细胞在培养表面（培养皿/瓶）所占的比例。
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细胞冻存/复苏掌握"慢冻快融"的原则，进行程序降温。 慢冻常有两种方法: 1. 手动程序降温，将细胞依序放在4℃（30分钟）、-20℃（1小时）、-80℃（过夜）后移至液氮中保存。 2. 程序降温盒，是普遍使用的降温法，作为一种特制冷冻容器(填充异丙醇或依靠特制金属导热)，可以让细胞以约-1℃/min的速度降至-80℃（过夜），然后移至液氮中保存。 快融：将冻存在液态氮中的细胞冻存管快速移至已37℃预热的水浴锅中(水面需低于管口，避免水分意外进入冻存管），使细胞冷冻悬液迅速融化，从而快速通过-20℃~0℃（结晶形成温度范围），使细胞外的冰晶迅速融化，避免缓慢融化的水渗入细胞内形成结晶，对细胞造成二次伤害。掌握"慢冻快融"的原则，进行程序降温。
慢冻常有两种方法:
1. 手动程序降温，将细胞依序放在4℃（30分钟）、-20℃（1小时）、-80℃（过夜）后移至液氮中保存。
2. 程序降温盒，是普遍使用的降温法，作为一种特制冷冻容器(填充异丙醇或依靠特制金属导热)，可以让细胞以约-1℃/min的速度降至-80℃（过夜），然后移至液氮中保存。
快融：将冻存在液态氮中的细胞冻存管快速移至已37℃预热的水浴锅中(水面需低于管口，避免水分意外进入冻存管），使细胞冷冻悬液迅速融化，从而快速通过-20℃~0℃（结晶形成温度范围），使细胞外的冰晶迅速融化，避免缓慢融化的水渗入细胞内形成结晶，对细胞造成二次伤害。上海逍鹏可提供细胞冻存液产品：
1. 细胞冻存液 I号（货号：3510/3511，无酚红）
2. 无血清细胞冻存液 2号（货号：3522/3523，无酚红）
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微生物污染 -
病毒在形态上容易观察到细胞病变(CPE, cytopathic effect) ，可能呈现细胞碎片增多、肿大、圆缩、脱落、大量悬浮聚集在培养基中，严重时可在细胞表面观察到局部破损空斑(Plaque)。病毒需种属配对才能增殖，因此污染概率相对较低。在形态上容易观察到细胞病变(CPE, cytopathic effect) ，可能呈现细胞碎片增多、肿大、圆缩、脱落、大量悬浮聚集在培养基中，严重时可在细胞表面观察到局部破损空斑(Plaque)。病毒需种属配对才能增殖，因此污染概率相对较低。可选用辐照血清以避免带进任何活的微生物进入培养体系。
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细胞株交叉污染细胞株间的交叉污染常发生在不经意间，例如由于实验操作的疏忽(不同细胞株分盘时，共用一瓶培养基，枪头、移液管忘记更换）而造成不同细胞株间的混合污染，或是实验操作人员写错细胞株名称(继代时的培养皿、冷冻细胞时的冻存管)。因为此问题非常严重，大部分的科学期刊已要求若要用到细胞做实验，均需附上"细胞鉴定报告"才可能发表文章。细胞株间的交叉污染常发生在不经意间，例如由于实验操作的疏忽(不同细胞株分盘时，共用一瓶培养基，枪头、移液管忘记更换）而造成不同细胞株间的混合污染，或是实验操作人员写错细胞株名称(继代时的培养皿、冷冻细胞时的冻存管)。因为此问题非常严重，大部分的科学期刊已要求若要用到细胞做实验，均需附上"细胞鉴定报告"才可能发表文章。
上海逍鹏可提供：
1. 人源细胞系STR鉴定(STR Authentication)，Cat No.: T802000011.
以下情况需要做STR鉴定：1). 实验室建立新的细胞系 2). 细胞来源于组织-原代细胞 3). 细胞功能不正常 4). 文章发表 5). 常规定期鉴定；
2. 细胞物种鉴定(Species ldentification)-15种常见模式动物的鉴定，Cat No.:T80300001。 -
支原体支原体是细胞培养实验中极其常见的污染物，发生的概率>50%。 支原体常见于人体皮肤、呼吸道、生殖道和消化道，消毒不完全的器具与低质量的试剂，如胰酶等 也易带入支原体进入培养体系。由于它们非常小(0.15-0.3um)，增长速度相对于细菌比较缓慢，污染 时不容易用常规方法发现。支原体污染时细胞培养基可能依然清澈或呈微黄色。 支原体会影响到细胞形态、增殖、基因表达与蛋白合成及代谢反应。同时因为提取到的DNA/RNA与 蛋白可有高达30~50%为支原体来源，会造成QPCR或Western Blot实验结果的偏差。
支原体是细胞培养实验中极其常见的污染物，发生的概率>50%。
支原体常见于人体皮肤、呼吸道、生殖道和消化道，消毒不完全的器具与低质量的试剂，如胰酶等 也易带入支原体进入培养体系。由于它们非常小(0.15-0.3um)，增长速度相对于细菌比较缓慢，污染 时不容易用常规方法发现。支原体污染时细胞培养基可能依然清澈或呈微黄色。
支原体会影响到细胞形态、增殖、基因表达与蛋白合成及代谢反应。同时因为提取到的DNA/RNA与 蛋白可有高达30~50%为支原体来源，会造成QPCR或Western Blot实验结果的偏差
上海逍鹏可提供：支原体检测/处理/预防全套解决方案：
1. MycoEZ 支原体qPCR检测试剂盒 MycoEZ, Mycoplasma qPCR Kit,Cat No.: M5010-0025；
2. 支原体污染处理试剂Mycoplasma Treatment Reagent；
方案一：MycoNator™-1 Antibiotic Solution 100X Conc.,Cat No.:C3470＋MycoNator™-2 Antibiotic Solution 100X Conc.，Cat No.: C3471
或者方案二：MycoNator™-3 Antibiotic Solution 100X Conc. ,Cat No.: C3472；
3. 支原体、细菌、真菌污染预防喷雾剂Pharmacidal，Cat No.: C3490；
4. Akouguard-1，Cat No.:C3480，有效消毒二氧化碳培养箱中的水盘；
5. Akouguard-2，Cat No.:C3481，有效消毒任何形式的水浴环境。
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霉菌类似棉花絮状的漂浮物可能是霉菌污染。这类的污染在早期并不会使培养基变黄，但在显微镜下可观察到菌丝体。类似棉花絮状的漂浮物可能是霉菌污染。这类的污染在早期并不会使培养基变黄，但在显微镜下可观察到菌丝体。
上海逍鹏可提供：抗生素选择方案
1. C3420 （青链双抗）；
2. C3421 （青链双抗，10X浓缩液）；
3. C3422 （青链霉素，制霉菌素三抗溶液）；
4. C3423 （青链霉素，两性霉素B三抗溶液）；
5. C3424 （青链霉素，新霉素三抗）；
6. C3430 （两性霉素B）；
7. C3440 （制霉菌素混悬液）；
8. C3450 （硫酸庆大霉素溶液）；
9. C3460 （卡那霉素溶液）。
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酵母菌成串的珠状物形态，体积比细胞小5~10倍。污染严重时，会造成培养基pH值改变，不易除去。酵母菌出芽生殖时呈一大一小的连体结构，可以通过此特点识别。成串的珠状物形态，体积比细胞小5~10倍。污染严重时，会造成培养基pH值改变，不易除去。酵母菌出芽生殖时呈一大一小的连体结构，可以通过此特点识别。
上海逍鹏可提供：抗生素选择方案
1. C3420 （青链双抗）；
2. C3421 （青链双抗，10X浓缩液）；
3. C3422 （青链霉素，制霉菌素三抗溶液）；
4. C3423 （青链霉素，两性霉素B三抗溶液）；
5. C3424 （青链霉素，新霉素三抗）；
6. C3430 （两性霉素B）；
7. C3440 （制霉菌素混悬液）；
8. C3450 （硫酸庆大霉素溶液）；
9. C3460 （卡那霉素溶液）。 -
细菌细菌污染时培养基可能呈黄色/白色混浊的现象。 同时可能造成细胞增殖缓慢或形态改变(多角、多核等)，细胞质中产生空泡、细胞不附着、培养基观察到不正常的pH值变化。在显微镜观察下会看到背景有大量黑点，可从异物的大小、形态、运动情况来判断是否为细菌污染。细菌污染时培养基可能呈黄色/白色混浊的现象。
同时可能造成细胞增殖缓慢或形态改变(多角、多核等)，细胞质中产生空泡、细胞不附着、培养基观察到不正常的pH值变化。在显微镜观察下会看到背景有大量黑点，可从异物的大小、形态、运动情况来判断是否为细菌污染。上海逍鹏可提供：抗生素选择方案
1. C3420 （青链双抗）；
2. C3421 （青链双抗，10X浓缩液）；
3. C3422 （青链霉素，制霉菌素三抗溶液）；
4. C3423 （青链霉素，两性霉素B三抗溶液）；
5. C3424 （青链霉素，新霉素三抗）；
6. C3430 （两性霉素B）；
7. C3440 （制霉菌素混悬液）；
8. C3450 （硫酸庆大霉素溶液）；
9. C3460 （卡那霉素溶液）。
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黑胶虫“黑胶虫”现象：通常在镜下观察到呈卵圆状或球杆状小黑点，并呈现布朗运动以及明显的增殖现象，可引起细胞生长变缓甚或裂解和凋亡。 参考文献: 1.“Nanobacteria are Mineralo Fetuin Complexes”Didier Raoult, Patricia Renesto et al.PLoS Pathogens.2008 Feb.,4(2): e41 2.“Membrane Vesicles NucleateMineralo-organic Nanoparticles and induce Carbonate ApatitePrecipitation in Human Body Fluids”-Cheng-Yeu Wu, John D. Young et al. The Journal of BiolocalChemistry.2013 Oct.,288(42):30571-30584“黑胶虫”现象：通常在镜下观察到呈卵圆状或球杆状小黑点，并呈现布朗运动以及明显的增殖现象，可引起细胞生长变缓甚或裂解和凋亡。
参考文献:
1.“Nanobacteria are Mineralo Fetuin Complexes”Didier Raoult, Patricia Renesto et al.PLoS Pathogens.2008 Feb.,4(2): e41
2.“Membrane Vesicles NucleateMineralo-organic Nanoparticles and induce Carbonate ApatitePrecipitation in Human Body Fluids”-Cheng-Yeu Wu, John D. Young et al. The Journal of BiolocalChemistry.2013 Oct.,288(42):30571-30584上海逍鹏接收来自全国近百个“黑胶虫”的样本，经过分析，62%为细菌，38%为支原体，其中包括Mycoplasma hyorhinis（猪鼻支原体），Mycoplasma bovis（牛支原体），Actinobacterium ZXY023（放线菌），Ralstoniasp./Ralstoniainsidiosa（罗尔斯通菌属），Brevundimonas sp （短波单胞菌属）等。“黑胶虫”的引入：可能是从质量不合格的科研试剂(如胰酶、血清等)或操作人员以及不洁的耗材与环境引入至培养体系。
上海逍鹏可提供：黑胶虫清除方案方案
“黑胶虫”清除方案一：C3470 MycoNator-1（支原体处理试剂1）与C3471 MycoNator-2（支原体处理试剂2）与VivaCell三抗溶液的使用；
“黑胶虫”清除方案二：C3472 MycoNator-3 （支原体处理试剂3）与 VivaCell三抗溶液的使用。
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