目前对于外泌体的标记方法有很多种，主要是通过亲脂性的染料PKH-67（green）/PKH-26（red），亲脂性羰花青染料（carbocyanine dyes） DiI/DiD/DiO/DiR。这些染料可以稳定的与外泌体的膜脂质区结合并发出荧光，可以用于外泌体的功能学研究。

1. 亲脂性染料:PKH-67（green）/PKH-26（red）

PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。相比于PKH-67，PKH-26（red）具有更长的半衰期，标记在兔红细胞上的PKH26半衰期长达100天以上。特别适用于体外增殖研究以及长期的体内细胞跟踪研究。

 

Biomaterials. 2014

2. 亲脂性羰花青染料（carbocyanine dyes）:DiI/DiD/DiO/DiR

DiI,DiO,DiD,DiR是一系列亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。这些环境敏感性荧光染料在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强。

DIR，近红外荧光的亲脂性DiOC18（“DiR”）在水中微弱荧光。

体内静脉注射DiR标记的外泌体，24H后进行成像观察，J Extracell Vesicles. 2015

实验流程

1. 外泌体提取和纯化
2. 外泌体浓度测定
3. 外泌体荧光标记（PKH67/PKH26染色、:DiI/DiD/DiO/DiR染色）
4. 荧光外泌体纯化
5. 荧光外泌体浓度标记
6. 成像观察

 

检测周期

收到样本后15-20个工作日。

 

 

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外泌体的功能学研究