生产重组蛋白的挑战
许多实验室放弃使用哺乳动物表达系统来生产重组蛋白,因为这可能是一个繁琐的过程。您将需要大量的板、培养瓶或滚瓶。在某些情况下,您甚至需要使用搅拌罐式容器。对于这些方法,细胞培养条件本质上是非生理性的。
在 FiberCell,我们的目标是通过 Hollow FIber 生物反应器为您提供最佳条件,以实现最佳细胞培养结果
难表达蛋白质
难表达蛋白通常被认为是在哺乳动物系统中以低滴度表达的重组蛋白。然而,这也可能包括高度复杂、高度糖基化、大而不稳定的蛋白质。
与其他宿主(如细菌、昆虫细胞和酵母)相比,哺乳动物细胞具有优异的蛋白质溶解度、免疫原性和生物活性。
培养的哺乳动物细胞是生产用于临床应用的重组蛋白的首选平台,因为它们能够进行适当的蛋白质折叠、组装和翻译后修饰。蛋白质质量的这种优越性在研究实验室中也很重要,以确保适当的生物活性,尤其是对于潜在的治疗性蛋白质。
在 3-D 中空纤维生物反应器中,连续过程、无传代和随着时间的推移维持生物稳态培养条件导致折叠得到改善,翻译后修饰完整均匀。更像体内的生长条件和 HFBR 内缺乏剪切也导致细胞裂解显着减少。宿主细胞蛋白、溶菌酶和 DNA 不会释放到培养基中,从而获得更容易纯化的产品。
为什么中空纤维生物反应器 (HFBR) 是生产重组蛋白的首选方法?
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分泌蛋白浓度比传统组织培养上清液高 100 倍
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从 FiberCell培养筒中收获的蛋白质含量为 100 μg/mL/天或更高。每日收获量为每天 2 mg至 10 mg。
中空纤维生物反应器 (HFBR) 允许您的细胞在类似体内的 3D 细胞培养环境中生长,该环境与哺乳动物系统非常相似。HFBR 提供:
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与培养瓶、滚筒或旋转器培养相比,在浓度高 100 倍时,可轻松扩大细胞培养规模,提高蛋白质保真度。
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用于细胞粘附的大表面积和高细胞密度允许使用我们的 CDM-HD 血清替代品。
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在较长的培养时间内,改善蛋白质折叠和更均匀的翻译后修饰。
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蛋白质浓度100 ug 至 300 ug/mL/天。
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生产重组蛋白的更简单方法:
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无需分流细胞;每天只需 15 分钟的维护。
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培养物可以连续生产数月。
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改善蛋白质组装和折叠。
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收获量小,易于处理和更高效的下游加工。
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减少细胞裂解,减少宿主细胞蛋白和 DNA 污染。
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无需使细胞适应悬浮培养或培养基优化。
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使用无蛋白 CDM-HD 简化了纯化过程。
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参考文献
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