FiberCell系统适用于长期大量收获外泌体，可收获外泌体长达数月。

与培养瓶培养相比，中空纤维生物反应器 （HFBR） 具有显著优势

细胞外囊泡具有非常高的比活性，但由于其分泌水平低，因此难以产生大量用于实验和研究的囊泡，从而阻碍了它们的进展。生产外泌体的最常见方法是使用大量的 T 瓶。扩增细胞并仅使用基础培养基（不含血清）进行最终收获，因为血清含有大量污染性内源性外泌体。外泌体的组成和活性反映了细胞分泌时的生理状态，这种方法远非生理学或与体内条件相关。这种方法浪费、耗时、效率低下，并且不适合扩大临床应用规模。

HFBR 是培养大量细胞并收获分泌外泌体的体内最接近的方法。是在生理细胞培养条件下收集和浓缩大量外泌体的理想选择。

如果需要血清，则只能在循环培养基中使用，而含有细胞和分泌的外泌体的 ECS 可以保持无血清状态。HFBR 可以促进无蛋白培养基的使用，例如 CDM-HD。分泌的细胞外泌体的收集可以维持数周或数月的连续生产。

中空纤维生物反应器是临床规模生产细胞外囊泡的首选方法

在 HFBR 中可以产生克级的外泌体。

• 细胞外泌体的浓度提高 10-100 倍。
• 不受血清中存在的内源性细胞外泌体的干扰。
• 细胞凋亡的减少。
• 无血清饥饿，更符合生理细胞培养条件。
• 连续生产数月。
• 无需细胞传代。
• 封闭的一次性系统。
• 连续的生物制造过程。
• 可能在 cGMP 下进行临床规模生产。
• 使用当前技术可以进行克级生产。

血清饥饿与 10% CDM-HD 的对比

标准 EV 生产可能需要使用 T 型瓶和使用不含血清的基础培养基进行 EV 采集。在下面的示例中，基础培养基在收集阶段补充了 10% CDM HD。CDM HD 显著提高了 EV 产量。

收获物取自T175 培养瓶，含量约为 2.5×10⁶每个培养瓶中的总细胞数。血清饥饿的培养瓶在 10% FBS + DMEM 中生长，并在采集前将血清饥饿 48 小时。将 CDM-HD 培养基培养瓶在 10% FBS+DMEM 中生长，并在采集前 48 小时改用 10% CDM-HD+DMEM。每个培养瓶含有 35 mL 培养基。颗粒浓度如下（颗粒/mL）：MSC-血清饥饿 （4.6×10⁸）、MSC-CDM-HD （3.7×10⁹）、前列腺血清饥饿 （3.0×10⁹、前列腺 CDM-HD （2.9×10¹⁰).

推荐应用外泌体富集的培养筒：

参考文献

• Large-scale preparation of extracellularvesicles enriched with specific micro-RNA: Yoo, KW et al. ; TissueEngineering. 2018 [abstract]
• Scalable, cGMP-compatible purification ofextracellular vesicles carrying bioactive human heterodimeric IL-15/lactadherincomplexes: Watson,D.C. et al.; J Extracell Vesicles. 2018 Feb 28;7(1) [openacccess]
• Use of a Hollow Fiber Bioreactor to CollectExtracellular Vesicles from Cells in Culture: Yan IK et al.; Methods MolBiol. 2018;1740:35-41 [abstract]
• Clinical Scale Production and Wound HealingActivity of Human Adipose Derived Mesenchymal Stem Cell Extracellular Vesiclesfrom a Hollow Fiber Bioreactor. [FibercellPoster ISEV2017]
• Efficient production and enhanced tumordelivery of engineered extracellular vesicles: Watson DC et al.;Biomaterials 105, 2016: 195-205 [open access]

长期大量收获外泌体