A答：细胞发生支原体或黑胶虫污染可以作鉴别诊断。支原体污染细胞后可以结合相关特征与方法学检测可以定性，但目前对黑胶虫没有明确定论，需要结合黑胶虫污染细胞的特征进行正确处理。
1) 污染严重的细胞培养物请直接加入消毒液或酒精处理后带出细胞房丢弃。
2) 如果污染程度较低，细胞状态一般，或者细胞珍贵，可以采取挽救措施。向完全培养基中加入支原体清除试剂（货号：C3470+C3471；或C3472）或黑胶虫清除试剂（货号：C3470+C3471+C3423；或C3472+C3423）培养，正常培养与传代观察细胞状态。另外在传代时提高细胞接种密度，让细胞成为孔板中的“优势群体”。待处理1-2个周期后未见污染物，可做支原体污染鉴定，鉴定为支原体阴性且细胞恢复正常状态后可继续开展相关研究。

A答：细胞培养发生细菌或真菌污染比较常见，需要我们根据污染程度和细胞状态进行正确处理。
1) 污染严重的细胞培养物请直接加入消毒液或酒精处理后带出细胞房丢弃。
2) 如果污染程度较低，细胞状态一般，或者细胞珍贵，可以采取挽救措施。使用双抗或三抗进行清洗和培养，提高双抗或三抗的比例，一般是5-10%，正常培养与传代观察细胞状态。另外在传代时降低细胞接种密度，也是减少污染物的接种。待传代2-3代未见污染物后，可做相关细胞功能鉴定，细胞恢复正常状态后可继续开展相关研究。
其中细胞发生真菌污染相对较难清除干净，或者清除不彻底容易污染他人细胞或环境，非必须挽救细胞请直接处理培养物，并对环境、设备、操作台面等进行清洁消毒。另外细胞发生细菌污染也尽量查找出源头，比如个人操作、环境、公共试剂等，正确处理与预防。

A答：先用酒精清洁擦拭，然后使用灭菌喷壶（VivaCell 货号：C3490）喷洒消毒，可有效预防真菌（和孢子）、细菌（和芽孢）、支原体和病毒的生长和污染。Aquaguard-1是多功能性，即用型的浓缩溶液，可有效消毒培养箱中的水盘。将其稀释100倍即可使用，即将10 mL Aquaguard-1溶液加至1 L水中，倒入培养箱的水盘。每2-4 周更换一次水盘中的无菌水。

A答：如果确定是支原体污染，可以不加双抗/三抗；如果用于预防污染（如普通细胞培养或是原代细胞分离），可以添加支原体处理试剂和双抗/三抗。

A答：两种消毒剂具有广谱抗菌活性，对不锈钢无腐蚀性，按照说明书正确操作。
1) Aquaguard-1的建议浓度：按照1:100无菌水稀释。CO2培养箱使用的水是重要的污染源，一旦发生微生物污染，建议将50 mL Aquaguard-1溶液加至5 L水中，每2-4周更换一次培养箱中的无菌水。
2) Aquaguard-2的建议浓度：按照1:500无菌水稀释。将2 mL的Aquaquard-2浓缩液加入到1 L水中，放置于水浴锅，建议1-2周更换一次。

A答：通常采取15,000-20,000 x g，离心10 min来沉淀支原体，小心地移除上清液，保留沉淀（有时透明无色，并不能观察到）。离心机转速只有10,000 x g，请延长时间至30 min。

A答：三种抗生素成分的支原体处理试剂组成两种处理方案，具体操作如下描述。
1) 支原体污染处理方案1：加1 mL的支原体处理试剂1至100 mL培养基中，保持受污染的细胞在混合液中培养4天。期间需加入含支原体处理试剂1溶液的新培养基；4天后换液，加1 mL支原体处理试剂2溶液至100 mL的新培养基中，并维持培养3天；以上是一个处理循环阶段，必要时可继续2-3次如上处理循环。在处理过程中，细胞需要做支原体污染检测，以确认效果，从而适当减少实验过程。
2) 支原体污染处理方案2：加1 mL支原体处理试剂3至100 mL培养基中；持续培养14天，期间每2-3天更换一次培养基。14天后，用不含支原体处理试剂3的完全培养基继续培养细胞14天后再做支原体鉴定。
两种处理方案均可以用于支原体污染的清除，一般选择其中一种方案即可。如果出现方案1清除效果不好，可以再使用方案2，一般两种方案结合使用，可以清除大部分的支原体污染。

A

答：分离原代细胞初期，为了避免污染，一般会建议预防性加入适量双抗或者三抗。多加抗生素对细胞无益，可以在细胞培养稳定后降低用量或不加抗生素。已知抗生素对细胞有不同影响，如下表所示：