400 - 820 - 3979
A答:大多数品牌的血清产品均会含有沉淀物,肉眼可见或不可见,血清沉淀的发生多数情况无法控制,其沉淀量也很难预估,需要科研人员正确保存与使用血清产品。
1) 血清中的沉淀主要有:纤维蛋白(絮状沉淀),脂蛋白,冷凝集素,玻连蛋白,胎球蛋白[1],磷酸钙(显微镜下小黑点沉淀),胆固醇等。
2) 造成沉淀的原因主要有:热灭活血清;反复冻融;长期储存在2-8℃;室温或37℃水浴锅中融化;伽马辐射;在室温下放置时间过长。
3) 预防/处理措施:建议将血清分装后放置在-20℃保存;避免反复冻融;将血清从-20℃冰箱放入4℃冰箱使之全融(间断摇晃均匀),待全部溶解后再分装;如有沉淀,建议400 x g离心5 min,取上清使用。我们不建议对有沉淀物的血清产品进行过滤去除,一方面可能会堵住滤膜;另一方面过滤可能会导致血清中一些营养物质的流失,导致细胞培养效果降低。
(参考文献:[1] Didier Raoult, Patricia Renesto et al. PLoS Pathogens. 2008 Feb., 4(2): e41.)

关于血清沉淀是否会影响细胞生长,我们的经验以及客户的测试发现血清沉淀物不会影响细胞的培养,其它血清生产商也证明了这一说法。

A答:其它动物血清(成年牛、小牛、马、猪、羊、鸡等)在正确解冻后会比胎牛血清要浑浊,或是有沉淀物产生,因为成年动物血清中含有更高的蛋白质和一些微量金属元素,更容易产生沉淀或变得浑浊。使用前可以摇晃均匀,正常添加使用即可。
A答:用于细胞培养的血清产品是否有必要热灭活处理,建议查阅相关权威网站或资料后再操作。
1) 实验显示,对大多数的细胞而言,不需要使用热灭活血清。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进或完全没有作用,造成细胞生长速率降低。同时沉淀物会显著增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察呈小黑点或絮状物,影响细胞观察。若非必须,不需要做热灭活处理。
2) 加热可以灭活补体系统。启动的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,启动淋巴细胞和巨噬细胞活化。在免疫学研究中,培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。
3) 热灭活时请将血清置于 56℃水浴30 min。最好另加一个盛放与血清等体积水的烧杯,并将温度计插入水中,以水中温度56℃为计时开始时间,加热过程中不时轻轻旋转混匀血清。或者直接购买VivaCell热灭活血清。

A答:网站上关于黑胶虫的说法有很多,需要大家正确认识与判断。
1) 目前科学界对黑胶虫的身份并无定论, 通常是显微镜下观察到密密麻麻的小黑点在培养基中自主游动,就称为黑胶虫污染。
2) 本公司技术服务部“Dr.Cell”目前检测的数十个所谓“黑胶虫”的样本,检测结果显示62%为细菌(如Sphingomonas paucimobilis,Blastomonas natatoria strain等),38%为支原体(如:Mycoplasma hyorhinis,Mycoplasma pulmonis strain等)。
3) 黑胶虫在镜下的典型特征呈卵圆状、球状、杆状等,可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡。目前没有充分的数据表明黑胶虫来源于血清,因为其尺寸远大于血清过滤时所用的0.1 μm滤膜。建议客户通过使用三抗(VivaCell货号:C3423)外加支原体处理试剂3(VivaCell 货号:C3472)尝试清除黑胶虫。

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