400 - 820 - 3979
A答:VivaCell在生产过程中将胰酶进行3次0.1 μm过滤并进行辐照以达到完全杀灭微生物的状态。在质量控制中,胰酶产品需要经过无菌检测、猪细小病毒检测和支原体等检测,以确保产品质量和安全性。
A答:需要结合细胞状态、胰酶产品的保存与使用等情况进行分析。
1) 一般消化时间控制在5 min以内,若出现消化过久问题,有可能胰酶保存不当已经失活。建议将大瓶胰酶分装后冻存;使用前最好37℃水浴或培养箱回温;使用不含钙镁的缓冲液清洗细胞;依据不同细胞种类调整胰酶用量和消化时间及温度。
2) 消化条件不稳定会导致黏附力低的细胞被消化下来并进入传代培养,黏附力强的细胞可能无法顺利被消化而丢失,造成人工筛选细胞的过程。因此,在摸索好合理的消化条件后,应保持恒定的胰酶用量、消化时间及温度,避免细胞被差异性的筛选。

A答:血清终止的原理是竞争抑制,就是用过量的血清中含有的蛋白与胰酶结合,不给胰酶消化细胞蛋白的机会。 
A

答:胰酶是一种蛋白酶,酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽键,通过在特定位置上降解蛋白,使细胞膜上和培养皿壁结合处蛋白降解,使两者分离。这时细胞在自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力作用下成为球形。

图1. 胰酶酶切位点

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