A答：多次使用同一瓶胰酶且反复冻融，会降低消化效果并有可能造成污染，因此有必要对胰酶进行分装。胰酶分装时遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则，避免在冷冻保存时，试剂体积膨胀导致容器破损而造成污染。

A答：以下原因供参考：
1) 消化时间不够。
2) 吹打力度不够。
3) 胰酶消化液浓度不够。
4) 胰酶保存不当导致失效。
5) 细胞融合度高，传代时机太晚。

A答：Annexin V（膜联蛋白）是Ca2+依赖的蛋白，EDTA会螯合Ca2+从而影响Annexin V，进而影响结果，因此选用不含EDTA的胰酶。

A答：VivaCell在生产过程中将胰酶进行3次0.1 μm过滤并进行辐照以达到完全杀灭微生物的状态。在质量控制中，胰酶产品需要经过无菌检测、猪细小病毒检测和支原体等检测，以确保产品质量和安全性。

A答：需要结合细胞状态、胰酶产品的保存与使用等情况进行分析。
1) 一般消化时间控制在5 min以内，若出现消化过久问题，有可能胰酶保存不当已经失活。建议将大瓶胰酶分装后冻存；使用前最好37℃水浴或培养箱回温；使用不含钙镁的缓冲液清洗细胞；依据不同细胞种类调整胰酶用量和消化时间及温度。
2) 消化条件不稳定会导致黏附力低的细胞被消化下来并进入传代培养，黏附力强的细胞可能无法顺利被消化而丢失，造成人工筛选细胞的过程。因此，在摸索好合理的消化条件后，应保持恒定的胰酶用量、消化时间及温度，避免细胞被差异性的筛选。

A答：血清终止的原理是竞争抑制，就是用过量的血清中含有的蛋白与胰酶结合，不给胰酶消化细胞蛋白的机会。 

A

答：胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽键，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离。这时细胞在自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力作用下成为球形。

图1. 胰酶酶切位点

A答：不建议频繁更换。每一株细胞都有特定或适应的细胞培养基，如果突然更换不同成分的培养基，大多数细胞不能立即适应，会导致细胞生长缓慢、形态变化，甚至无法存活等。如果确实需要变换基础培养基，可提前了解两种培养基的成分与含量差异，逐步缓慢替换，设计相关替换的比例，比如1:1两种培养基搭配血清或其它营养物质进行细胞培养，观察细胞的变化，待细胞适应后，再开展相应的细胞生物学研究；如替换后细胞状态较差，则不建议继续替换。