400 - 820 - 3979
A答:大多数普通细胞株(肿瘤细胞等)建议:特级胎牛血清(VivaCell 货号:C04001)。对生长条件要求高的原代细胞和干细胞建议:胚胎干细胞专用特级胎牛血清(VivaCell 货号:C04002)、间充质干细胞专用特级胎牛血清(VivaCell 货号: C04400)、金牌胎牛血清-澳洲/新西兰来源(VivaCell 货号:C2820/C2830)。
A答:血清常用添加浓度是5%-20%。若细胞比较难养,可适当提高血清浓度(最高浓度不要超过20%)或添加2%-4%的血清与细胞培养添加物(ITS/ITS-E,VivaCell 货号:C3210/C3213)。
A两种产品主要从取血年龄、组分以及用途上进行区别。
1) 取血年龄不同:牛血清按照牛取血时间或牛龄可进行区分。胎牛血清(Fetal Bovine Serum,简称FBS)指的是取自未出生,母牛剖腹得来的胎牛。国产胎牛血清(并无明确定义,但通常以此称)指的是出生4-6小时,且未进行哺乳(Unsuckled)进食的牛,有时还称作国产新生牛血清或类胎牛血清。小牛血清(Newborn Calf Serum,简称NBCS)指的是出生14天到3个月,进行取血的牛血清。成年牛血清(Adult Bovine Serum,简称ABS)指的是取血时牛龄通常超过12个月的牛。以上取血牛龄的差异主要是受当地国家畜牧业的发展及法规限制影响,因为牛血多为畜牧业副产品,并未有专门为取血而养的牛。
2) 组分与比例不同:这几种不同牛龄血清所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组分与比例不同。常规来说,年龄越小的牛血清,细胞培养效果越好。胎牛血清培养效果好于新生牛,且因为胎牛未进食过母乳,所以IgG含量低。
3) 用途与用法不同:根据细胞所需生长条件可选择合适的血清进行培养。

A答:从-20℃冰箱取出血清,按照正确的方式解冻后,观察其外观。
1) 颜色:根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色。热灭活血清或保存不当的血清,由于血红蛋白的破坏氧化,会呈现出暗红,甚至咖啡色。但颜色不作为血清培养效果评价的标准之一。
2) 沉淀:血清中的沉淀主要是由纤维蛋白的凝聚或磷酸钙等产生。沉淀的产生原因很多,反复冻融或融解方式不正确会增加沉淀。
3) 澄清度:进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低,表现为稀薄。而国产血清,因为绝大多数是新生牛血清,相对而言更加粘稠,颜色略深。

A答:所有品牌的血清均有血清批次差异,或大或小,需要科研人员正确认识与对待。
1) 因为血清来源于动物,其组成成分有1000种左右,每个批号的组分和百分比含量都是不固定的,所以批间差异是存在的。
2) 建议先进行批号测试,并传代3次,以获得更客观的结论。筛选出合适批号,根据研究需要购买半年甚至一年以上的用量,避免批间差造成实验波动(胎牛血清在-20℃保存可达5年)。或者适当提高血清添加比例,待细胞适应2-3代后再把血清比例降到正常水平。也可以适当提高细胞接种密度,根据细胞状态变化进行实时调整。

A答:大多数品牌的血清产品均会含有沉淀物,肉眼可见或不可见,血清沉淀的发生多数情况无法控制,其沉淀量也很难预估,需要科研人员正确保存与使用血清产品。
1) 血清中的沉淀主要有:纤维蛋白(絮状沉淀),脂蛋白,冷凝集素,玻连蛋白,胎球蛋白[1],磷酸钙(显微镜下小黑点沉淀),胆固醇等。
2) 造成沉淀的原因主要有:热灭活血清;反复冻融;长期储存在2-8℃;室温或37℃水浴锅中融化;伽马辐射;在室温下放置时间过长。
3) 预防/处理措施:建议将血清分装后放置在-20℃保存;避免反复冻融;将血清从-20℃冰箱放入4℃冰箱使之全融(间断摇晃均匀),待全部溶解后再分装;如有沉淀,建议400 x g离心5 min,取上清使用。我们不建议对有沉淀物的血清产品进行过滤去除,一方面可能会堵住滤膜;另一方面过滤可能会导致血清中一些营养物质的流失,导致细胞培养效果降低。
(参考文献:[1] Didier Raoult, Patricia Renesto et al. PLoS Pathogens. 2008 Feb., 4(2): e41.)

关于血清沉淀是否会影响细胞生长,我们的经验以及客户的测试发现血清沉淀物不会影响细胞的培养,其它血清生产商也证明了这一说法。

A答:其它动物血清(成年牛、小牛、马、猪、羊、鸡等)在正确解冻后会比胎牛血清要浑浊,或是有沉淀物产生,因为成年动物血清中含有更高的蛋白质和一些微量金属元素,更容易产生沉淀或变得浑浊。使用前可以摇晃均匀,正常添加使用即可。
A答:用于细胞培养的血清产品是否有必要热灭活处理,建议查阅相关权威网站或资料后再操作。
1) 实验显示,对大多数的细胞而言,不需要使用热灭活血清。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进或完全没有作用,造成细胞生长速率降低。同时沉淀物会显著增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察呈小黑点或絮状物,影响细胞观察。若非必须,不需要做热灭活处理。
2) 加热可以灭活补体系统。启动的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,启动淋巴细胞和巨噬细胞活化。在免疫学研究中,培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。
3) 热灭活时请将血清置于 56℃水浴30 min。最好另加一个盛放与血清等体积水的烧杯,并将温度计插入水中,以水中温度56℃为计时开始时间,加热过程中不时轻轻旋转混匀血清。或者直接购买VivaCell热灭活血清。

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