A答：通常采取15,000-20,000 x g，离心10 min来沉淀支原体，小心地移除上清液，保留沉淀（有时透明无色，并不能观察到）。离心机转速只有10,000 x g，请延长时间至30 min。

A答：三种抗生素成分的支原体处理试剂组成两种处理方案，具体操作如下描述。
1) 支原体污染处理方案1：加1 mL的支原体处理试剂1至100 mL培养基中，保持受污染的细胞在混合液中培养4天。期间需加入含支原体处理试剂1溶液的新培养基；4天后换液，加1 mL支原体处理试剂2溶液至100 mL的新培养基中，并维持培养3天；以上是一个处理循环阶段，必要时可继续2-3次如上处理循环。在处理过程中，细胞需要做支原体污染检测，以确认效果，从而适当减少实验过程。
2) 支原体污染处理方案2：加1 mL支原体处理试剂3至100 mL培养基中；持续培养14天，期间每2-3天更换一次培养基。14天后，用不含支原体处理试剂3的完全培养基继续培养细胞14天后再做支原体鉴定。
两种处理方案均可以用于支原体污染的清除，一般选择其中一种方案即可。如果出现方案1清除效果不好，可以再使用方案2，一般两种方案结合使用，可以清除大部分的支原体污染。

A

答：分离原代细胞初期，为了避免污染，一般会建议预防性加入适量双抗或者三抗。多加抗生素对细胞无益，可以在细胞培养稳定后降低用量或不加抗生素。已知抗生素对细胞有不同影响，如下表所示：

A答：三抗本身是浓缩溶液，制霉菌素在高浓度饱和状态水溶性差会被析出呈黄色物质，溶液外观略显浑浊，属于正常现象，可以放心使用。

A答：青霉素通过抑制细菌细胞壁四肽侧链和五肽交连桥的结合而阻碍细胞壁合成并发挥杀菌作用，对革兰氏阳性菌有效，但革兰氏阴性菌缺乏五肽交连桥，因此青霉素对其作用不大。链霉素作用于细菌体内的核糖体，抑制细菌蛋白质合成，对革兰氏阴性菌有效。青链双抗联合抑制细菌，可以有效杀灭G+、G-菌。

A1) 答：血清产品储存于-20℃冰箱，有效期长达5年。若想避免反复冻融和分装污染，建议购买50 mL的盒装特级胎牛血清（VivaCell 货号：C04001-050X10）。
2) 血清产品在初次解冻后，可以按照实际研究用量进行分装，且分装到其它容器内需要预留一定的体积空间，防止血清结冰后体积过大导致容器的膨胀破损（例如，使用50 mL离心管分装时，血清体积一般不超过40 mL）。
3) 分装后的血清应当继续储存在-20℃条件下。如需要短期存放4℃冰箱，也请在一个月内使用完，期间也要及时观察血清的外观等变化，如有变质或产生很多沉淀等情况建议舍弃。另外分装保存的血清需要严格遵守产品说明，在指定的产品效期内使用完毕。

A答：血清解冻需采用逐步解冻法：将血清从-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解，待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀（小心勿造成气泡），减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃放入37℃解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。

A答：血清在ISO13485认证的厂房生产，经过3次0.1 μm滤膜过滤，出厂前经过无菌检测并且会使用三种以上的细胞株进行培养测试，无需对刚融化的血清进行过滤，反而会因为增加一道过滤的工序而增加污染的风险。细胞培养发生微生物污染有较多的可能原因，经分析，多因操作不规范或环境不洁导致。若血清出现污染，不建议过滤后使用，需要排查分装、设备、操作等相关情况，及时控制源头。